나의 실험에 가장 적합한 1차/2차 항체 선택 방법 

타깃 단백질에 대한 항체는 여러가지 형태로 존재합니다. 

예를 들면, GAPDH antibody라는 항체는 세포나 조직 등의 샘플 내에 존재하는 GAPDH 단백질을 detection합니다. 

그러나 그 형태는 다양하여 GAPDH antibody에 HRP, Biotin, FITC, 

다양한 형광 등 항체에 붙어 있는 물질은 매우 다양하며 그 쓰임새 (Application)가 매우 다양합니다.

Application 외에도 실험에 적합한 항체를 선택하는 것은 여러가지 요소를 고려해야 합니다.

 이들 요소의 고려는 올바른 항체 선택 및 구매 뿐 만 아니라 좋은 실험 결과를 얻기 위해서도 꼭 필요한 단계입니다.

1. Application

동일한 타깃을 detection 하는 항체의 종류는 매우 많이 있습니다. 

하지만 모든 항체들이 같은 실험방법에 적용할 수 있는 것은 아닙니다.

만약 실험자가 Western blot assay를 진행하고자 할 경우에는 그에 맞는 항체를 선택해야 하며, 

Immunofluorescence 실험을 위해서는 샘플 준비와 함께 실험에 적용할 수 있는 항체를 선택해야 합니다

타깃을 detection 하는 항체를 검색 후 Application에 목적 된 실험 방법이 표시되어 있는지 확인이 필요합니다.

2. Reactivity

항원(antigen)이라는 외부 물질을 동물(host)에 면역하여 생긴 항체를 정제하여 실험에 사용합니다. 

예를 들면, mouse에서 발현하는 beta actin 단백질을 rabbit에 면역하여 만들어진 

항체는 anti-mouse beta actin antibody라고 합니다. 

비록 mouse에서 발현하는 beta actin 단백질을 면역하였지만, 

human이나 rat에서도 beta actin의 단백질 서열의 유사성이 비슷할 경우 

해당 항체를 human이나 rat sample에서도 사용 할 수 있습니다. 

서열의 유사성으로 다양한 단백질을 하나의 항체로 사용할 수 있다는 것은 매우 경제적이라고 볼 수 있습니다.

3. Host

Host는 항체를 만들 때 사용한 동물의 종류를 뜻합니다. 

Human beta action 항체를 mouse에서 만들었다면, host는 mouse가 됩니다. 

Host는 1차 항체 사용 후 2차 항체 선택 시 중요한 선택 포인트가 됩니다. 

1차 항체가 mouse에서 제작 된, 즉 host가 mouse인 경우 2차 항체는 anti-mouse로 선택을 해야 합니다. 

2차 항체를 잘못 선택할 경우 detection이 되지 않거나 non-specific band가 관찰될 수 있습니다.

4. 2차 항체

host 선택에 따라 2차 항체를 선택해야 하지만, 한가지 더 고려해야 할 점은 

연구자가 어떤 실험을 할 것인가를 결정해야 합니다.

2차 항체는 대부분의 1차 항체와 다르게 HRP, Biotin과 같은 효소나 FITC나 PE와 같은 형광이 붙어 있습니다. 

붙어 있는 물질의 종류에 따라 적용 가능한 실험의 종류를 결정할 수 있습니다.

1차 항체와 2차 항체의 선택을 잘못할 경우 결과값이 나오지 않는 경우들이 많이 때문에, 

항체의 선택은 실험 방법 선택 시 꼭 고려해야 할 부분입니다. 

그 외에도 isotype 및 subtype이나 항체와 항원의 affinity 정도, 

2차 항체의 clonality 등도 고려해야 하는 경우도 있습니다. 

설명 된 내용은 항체 선택의 가장 기본적인 내용으로 꼭 기억하여 항체 선택에 도움이 되길 바랍니다.