오늘본상품

  • 내용

1. Antibody validation은 왜 필요한가?

 

항체를 이용한 실험에서 결과에 대한  재현성이 주요한 이슈가 되고 있습니다. 

현재 판매하는 수많은 항체들은 검증이 되지 않은 일반적인 형태로 학술 및 제약 연구 커뮤니티의 과학적 결과에 대한 신뢰 부족으로 이어졌습니다.

과연 연구자가 사용하는 항체가 정확하게 작용하여 원하는 타겟 단백질만을 겁출하는 지에 대한 궁금증과 이에 대한 검증 욕구로 많은 항체 제작 및 판매사에서는 항체의 검증 작업을 진행하거나 진행하고자 준비하고 있습니다.

 

항체를 선택할 때, 

단지 이 회사는 유명한 회사니까, 

이 제품은 reference가 많은니까 등의 단순한 이유로는 항체의 성능을 검증할 수 없습니다.

조금 더 정확하고 과학적이며 체계적인 방법의 항체 검증 프로그램이 필요한 상황입니다. 

 

2. 다양한 항체 validation 방법

 

정확하고 일관된 실험 결과의 확인은 항체가 예상처럼 작동하는지의 확인이 필수적입니다.

항체의 validation 방법은 매우 다양하며, 제조자가 확인하여 그 결과를 제공할수도 있지만, 연구자가 직접 자신이 사용하는 항체에 대한 실험을 통해 검증을 할 수 도 있습니다.

 

① Knock-out 테스트: 유전자 도구로 특정 유전자를 제거한여 타겟 단백질 발현을 억제한 후 WB, IHC 등의 테스트를 통해 negative 결과 확인

② Western blot 테스트: 분자량으로 단백질 샘플을 나눈 후 항원 특이적인 항체를 이용하여 결과를 확인 

③ IHC/ICC 테스트: 항원 특이적인 항체에 형광이나 효소를 conjugation 한 후 조직 혹은 세포에 처리하여 항원과 결합하였는지 확인 

④ siRNA knock-down 테스트: 단백질을 만들어 내는 유전자에 대한 siRNA를 처리하여 유전자가 단백질을 발현하는 것을 억제하는 방법 

 

이 외에도 IP-MS, Protein array, Expression profiles 등의 방법이 있습니다.

 

3. Adipogen의 Validation antibody 선택 기준

 

항체에 대한 검증 기준은 i) 특이성 (off target과의 결합 가능성) ii) 민감성 (on target과의 결합 가능성) 마지막으로 iii) 재현성 (lot과 lot 사이의 일관된 결과 확인)을 포함합니다.

Adipogen life sciences에서는 판매되는 항체에 대하여 아래 표시되는 여러 표시되는 여러 검증 기준 중 2가지 이상을 따라 항체에 대한 검증을 진행합니다.

 

① Detection of properly folded recombinant target protein, protein tags and closely related proteins 

② Analysis of cell lines with know target expression levels (positive controls) 

③ Analysis of cell lines know not to express the target protein (negative controls) 

④ Genetic approach: target-specific signal verified in transfected 

⑤ Comparison of results with antibody and isotype control to ensure acceptable signal-to-background ratio. 

⑥ Blocking with antigen peptide to confirm elimination of specific signal. 

⑦ Side-by-side comparison of a new lot with previous lots to ensure lot-to-lot consistency. 

⑧ Treatment of cells with appropriate triggers or physiological induction to detect an increase or a decrease of the target protein expression. 

⑨ Analysis of secreted targets in biological fluids (cell culture  

 

4. Adipogen의 다양한 validated antibody 


아래 링크를 클릭하면 Adipogen의 다양한 validated antibody를 확인할 수 있습니다.

링크: https://adipogen.com/antibody-validation

 

 

페이지 맨 위로 가기