Cytiva 크로마토그래피 FAQ 레진편

Q1. 레진의 유효기간은 어떻게 되나요?

A1. Cytiva에서 제공하는 레진(resin)의 Expiry date란,

사용하지 않은 레진을 기준으로 COA (Certificate of Analysis: 성적증명서)에 나온 기준값에 대해서 Cytiva가 보증하는 기간을 의미합니다.

실제적으로 레진을 사용하실 때에는 이와는 별도로, 사용하는 정제 프로세스에 따라서 별도의 Lifetime study를 진행하여 최대로 사용할 수 있는 cycle을 검증해야 합니다.

이는 보통 Small scale에서 예측한 뒤에, Large scale에서 확인을 하는 방식으로 진행합니다. 각각의 타겟 단백질과 불순물, 그리고 Cleaning 방식에 따라서 레진의 Lifetime은 달라지므로, 고객이 직접 검증을 해주셔야 하며,

Cytiva에서는 각 레진마다 정제 프로세스 중에서 일반적으로 가장 가혹한 조건인 CIP (Cleaninig-in-Place)를 기준으로 해서 레진의 성능이 유지되는 기간을 조사하기도 합니다.

 [그림 1] Capto™ Q 컬럼과 레진

 [그림 2] Capto™ Core 700 레진 

Q2. Affinity tag 종류와 정제 시, 어떤 것을 고려해야 할까요?

A2. 단백질에 affinity tag를 추가하면 정제 및 검출이 비교적 쉬우며, target 단백질의 용해도와 안정성을 향상시킬 수 있습니다.

Tag 선택 시 고려할 사항은 정제 목적, Tag 크기, 크로마토그래피 resin의 비용 등이 있습니다. 

아래 표는 가장 많이 사용되는 4가지 Tag에 대한 주요 특징을 보여줍니다.

His-tag은 단백질 정제에 일반적으로 가장 많이 사용하는 tag이며, binding capacity가 높은 반면 purity가 낮은 단점이 있습니다.

Strep-tag는 purity는 높지만 binding capacity가 낮습니다.

GST는 적절한 binding capacity와 purity를 가지고 있습니다.

 [그림 3] 가장 많이 사용되는 4가지 Tag의 주요 특징 및 Tag 선택 시 고려 사항 

Q3. His-tagged 단백질 회수율이 낮은 경우, 어떤 사항을 고려해야 하나요?

A3. 세포 배양 배지에 포함되어 있는 많은 components는 IMAC 수지와 호환되지 않기 때문에 단백질 정제의 수율을 낮추게 됩니다.

이는 샘플을 로딩하는 동안 IMAC 레진에 고정화 되어 있는 metal ions이 스트립핑이 되기 때문에, 점점 binding affinity가 약하게 되기 때문입니다.

이러한 경우는 EDTA 및 DTT와 같은 환원제에 대해 내구성이 강한 레진, 

Ni Sepharose excel 제품으로 교체하면 해결이 될 수도 있습니다.

Ni Sepharose Excel을 이용한다면, 금속 이온 스트리핑을 유발하는 물질을 포함한 배지를 제거하지 않고 샘플을 바로 로딩할 수 있으므로, 

워크플로우를 크게 단순화 할 수 있습니다.

[그림 4] Ni Sepharose™ Fast Flow(FF)와 Ni Sepharose excel 비교 

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